宋 诚, 王纪田, 石拴霞, 何毅刚, 程耀萍, 王 甜, 王 玲
生命科学研究. 2023, 27(6): 544-550.
以小鼠精原细胞系GC-1细胞为研究对象, 探讨缺氧条件下GC-1细胞凋亡潜在的分子机制。首先, 采用CCK-8 (Cell Counting Kit-8)法检测不同缺氧时间处理下的细胞活力, 以确定细胞缺氧损伤的时间; 然后, 通过化学荧光法检测GC-1细胞中活性氧(reactive oxygen species, ROS)的含量, 采用JC-1法检测线粒体的膜电位, 采用比色法检测ATP的含量, 采用线粒体荧光探针法检测线粒体的数量与分布, 并采用透射电镜观察细胞的超微结构; 最后, 利用实时荧光定量PCR检测线粒体信号通路相关基因胱天蛋白酶(caspase)-3、caspase-9、细胞色素c (cytochrome c, Cyt-c)、Bax和Bcl-2的mRNA表达水平。结果显示, 缺氧36 h后, 细胞活力为(60.36±5.40)%, 符合后续实验需求; 在缺氧条件下, GC-1细胞中的ROS含量显著增加, ATP含量显著下降, 线粒体膜电位下降、数量减少, 同时细胞中促凋亡相关基因的表达水平上调, 抗凋亡因子Bcl-2的基因表达水平下调。实验结果初步表明, 缺氧可导致GC-1细胞线粒体功能障碍, ROS/线粒体信号通路是缺氧导致GC-1细胞凋亡可能的分子机制。