生命科学研究

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董秋萍, 徐, 玥, 杨少斌, 冯婧文, 齐晓敏, 赵文铖, 王兆松, 许世磊

生命科学研究. 2015, 19(5): 377-380.

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摘要: 探讨miR-448对肺癌细胞增殖和运动的影响及其分子机制。采用实时荧光定量PCR (polymerase chain reaction)检测原发肺癌组织和癌旁正常组织miR-448表达水平。转染miR-448 mimic和inhibitor至肺癌A549细胞系, 通过MTT (3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide)、平板克隆形成和Transwell实验观察miR-448表达对A549增殖和运动能力的影响; 利用Western blot检测EMT (epithelial-mesenchymal transition)标志物蛋白表达水平, 通过实时荧光定量PCR检测EMT相关转录因子mRNA表达水平。实时荧光定量PCR显示较癌旁正常组织相比, miR-448在原发肺癌组织中表达降低。MTT和平板克隆形成实验显示, 过表达miR-448抑制A549细胞增殖和运动能力; 降表达miR-448增强A549细胞增殖和运动能力。Western blot显示降表达miR-448能下调上皮标志物E-cadherin, 上调间质标志物Vimentin表达水平。实时荧光定量PCR显示降表达miR-448能上调EMT相关转录因子Twist1和ZEB1 mRNA表达水平。miR-448可通过抑制EMT抑制肺癌进展。

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脱落酸和赤霉素对木枣果实成熟衰老和生理特性的影响

杨卫民, 杜京旗, 赵君

生命科学研究. 2015, 19(5): 381-385.

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摘要: 用不同浓度的外源激素脱落酸(abscisic acid, ABA)和赤霉素(gibberellic, GA3)分别处理木枣果实, 研究外源ABA和GA3对木枣果实成熟衰老的影响。结果表明, 枣果组织中, 随着ABA处理浓度的增加, 丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量呈先升高后降低的趋势, 而GA3处理则变化趋势相反; 脯氨酸(Proline)含量随着ABA浓度的增加呈先缓慢升高后降低的趋势, 而随GA3处理浓度增加呈直线下降趋势; 维生素C (VitC)含量随着ABA浓度的增加呈先急剧升高后快速降低的趋势, 而GA3处理则呈相反趋势; 过氧化氢酶(catalase, CAT)活性随着ABA浓度的增加呈先降低后升高的趋势, GA3处理则保持了较低水平状态。表明ABA与GA3作为信号分子对木枣果实成熟衰老的影响较为明显, 其生理作用在多方面表现为相互制约或互为拮抗特征。

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基于联合锋电位-局部场电位的整合野调制特性研究

师黎, 王苗苗, 牛晓可

生命科学研究. 2015, 19(5): 386-391.

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摘要: 整合野调制在生物视觉系统的图形背景分离和轮廓检测中具有重要作用。为了研究整合野空间频率调制特性, 首先测定单个神经元的感受野范围和整合类型, 挑选出要研究的抑制性神经元; 然后, 用匹配追踪算法和希尔伯特变换提取Spike触发的伽马频带LFP瞬时能量; 最后, 将Spike触发的伽马频带LFP (local field potential, LFP)瞬时能量用于分析神经元的整合调制特性.对在大鼠初级视觉皮层(primary visual cortex, V1区)采集的96个神经元进行统计分析, 实验结果表明: 1) Spike触发的伽马频带LFP瞬时能量可以作为分析V1区整合野调制特性的有效指标; 2) 基于Spike触发的伽马频带LFP瞬时能量所获得的抑制指数要显著高于通过Spike发放率以及伽马频带LFP功率的结果(P<0.001), 并且整合野的调制规律性更加明显, 个体适用性更好。

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拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata卵黄蛋白的分离纯化及性质

龚瑶, 黄婷, 谭昭君, 颜亨梅

生命科学研究. 2015, 19(5): 392-396.

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摘要: 用蒸馏水沉淀法、Sephacryl S-300 High Resolution Hiprep 26/60葡聚糖凝胶层析、蛋白质电泳的方法提取和纯化了拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata 的卵黄蛋白, 并对其性质进行了分析。用蒸馏水沉淀法能得到卵黄蛋白粗提液, 将得到的卵黄蛋白粗提液用Sephacryl S-300 High Resolution Hiprep 26/60凝胶柱过滤, 可以得到纯化的卵黄蛋白。电泳结合不同的染色方法证明拟环纹豹蛛卵黄蛋白是一种糖脂复合蛋白, 它由2个亚基组成, 亚基的相对分子质量分别为80.1 kD和57.4 kD。

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马氏珠母贝血清抗菌肽的初步分析

朱家萍, 雷倩楠, 梁海鹰

生命科学研究. 2015, 19(5): 397-401.

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摘要: 马氏珠母贝(Pinctada martensii)是生产海水珍珠的主要经济贝类, 近年来马氏珠母贝因病害频繁发生而对我国珍珠产业造成巨大的经济损失。因此, 对于马氏珠母贝的免疫机制研究尤为重要。抗菌肽是贝类生物免疫机制中最重要的一个环节, 但目前对马氏珠母贝抗菌肽的报道甚少。为深入了解马氏珠母贝的抗菌肽分子组成及特征, 本实验采取多步高效液相色谱结合质谱分析, 对马氏珠母贝血清中具有抗菌活性的蛋白质分子开展了分离纯化及鉴定研究, 得到了5种有明显抗菌活性的蛋白, 其中3种相对分子质量在5 000 kD左右; 通过透射电镜进一步观察了抗菌活性蛋白对细菌的作用机制。上述研究为了解马氏珠母贝抗菌肽的分子多样性及抗菌机制奠定了基础。

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人巨细胞病毒gB/AD1基因在CHO细胞中的表达和纯化

董金蓉, 毛树宝, 谢震渊, 沈谊清, 吴金妍, 罗剑, 方芳

生命科学研究. 2015, 19(5): 402-409.

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摘要: 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)在自然界中普遍存在, gB是该病毒表面的一种重要糖蛋白, 其AD1序列是主要的中和抗体表位之一。首先以HCMV基因组为模板, 通过PCR技术扩增出gB基因的一个片段, 该片段删除了跨膜区和胞内区, 仅保留AD1中和抗体表位, 然后被连接到哺乳动物细胞表达质粒pSGHV0上, 与dhfr基因通过电击转染至CHO/dhfr－细胞, 继而用60 nmol/L MTX筛选稳定表达细胞株, 用ELISA和Western blot检测AD1重组蛋白的表达, 最后用Ni2+-NTA亲和层析进行纯化。获得了真核细胞表达的重组融合蛋白, 表达量约为10 mg/L, 蛋白纯度可达到80%以上, 为HCMV表面糖蛋白gB功能的进一步研究以及基因工程疫苗的开发奠定了基础。

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蛛丝蛋白MiSp重组模块R1R2CT表达及其纤维化动力学研究

王锋, 陈格飞, 孟清

生命科学研究. 2015, 19(5): 410-414.

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摘要: 为探索蛛丝蛋白模块单元在成丝过程中的作用, 研究了大腹园蛛MiSp R1R2CT功能模块在不同pH条件下的纤维化动力学特性。大腹园蛛MiSp蛋白的R1R2CT功能模块与硫氧还蛋白融合, 并在BL21(DE3)中进行表达, 表达量约为15 mg/L LB培养基。R1R2CT蛋白在pH 7.5和6.5时较为稳定, 在22 h之内不发生纤维化; 当pH值降至5.5时, R1R2CT在前2 h内快速纤维化, 3～5 h趋势较为平缓; 5 h之后R1R2CT蛋白再次出现ThT信号的快速增长, 7 h后保持缓慢增长至22 h。R1R2CT的增长速率及幅度高于单独的CT (C-terminal)蛋白, 而单独的R1R2在pH 7.5、6.5和5.5时均保持稳定, 表明重复区依赖CT模块的快速纤维化模式。已有研究表明, CT在重复区纤维化过程中起晶核作用, 该成果也从反面证实CT的晶核理论。

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转Bar基因稻谷对小鼠（Mus musculus）肠道菌群的作用研究

刘金, 黄毅, 孙艳波, 颜亨梅

生命科学研究. 2015, 19(5): 415-421.

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摘要：选取6周龄、雌雄各半、体重18～22 g的SPF级昆明小鼠（Mus musculus） 100只，随机分成5组，每组4个重复，每个重复5只小鼠。分别用含量为40%和60%的转Bar基因稻谷Bar68-1和非转基因稻谷D68日粮喂养小鼠，亲代小鼠饲养180 d后开始繁殖子一代（F1），每代小鼠饲养180 d。在180 d后分别从亲代和子一代每组随机抽取5只小鼠，提取肠道内容物基因组DNA，利用细菌通用引物对细菌16S rDNA的V3区序列进行PCR扩增，并将扩增产物用变性梯度凝胶电泳（denaturing gradient gel electrophoresis DGGE）。研究显示，各组小鼠肠道菌群相似性系数无显著差异（P>0.05）；肠道主要优势菌群相同。结果表明，转Bar基因稻谷对小鼠肠道菌群的作用不明显。

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Klotho对CsA慢性肾毒性大鼠肾脏内质网应激相关凋亡的影响

李莎莎, 邓志勇, 何敖林, 叶建明, 刘其锋

生命科学研究. 2015, 19(5): 422-425.

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摘要: 24只雄性SD (Sprague dawley)大鼠在低盐饮食的基础上, 随机分为3组: 对照组、模型组、治疗组。模型组给予环孢素A (Cyclosporin A, CsA) 30 mg/kg/d腹腔注射共28 d建立慢性肾毒性大鼠模型; 治疗组在给予等量CsA的基础上腹腔注射给予重组可溶性Klotho蛋白(0.02 mg/kg/d腹腔注射, 隔日一次)。28 d后处死大鼠, 收集肾组织标本; 行Masson染色观察肾脏病理损害; TUNEL (TdT-mediated dUTP nick end labeling)染色观察细胞凋亡情况; Western-blot检测肾组织内质网应激标志物兔抗葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulated protein 78, GRP78)及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(pro-apoptotic protein CCAAT/enhancer binding protein homologous protein, CHOP)的表达情况。分析发现, 模型组大鼠肾脏病理损害明显加重, 肾小管上皮细胞大量凋亡, GRP78及CHOP表达显著上调, 而Klotho治疗组大鼠肾脏病理损害明显减轻, 细胞凋亡减少, GRP78及CHOP的表达明显降低。表明 Klotho蛋白可通过抑制内质网应激诱导的凋亡缓解CsA慢性肾毒性的发生。

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多柔比星诱导人前列腺癌细胞免疫原性死亡

吴红艳, 曹春雨, 杨建林, 王艳林

生命科学研究. 2015, 19(5): 426-431.

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摘要: 钙网蛋白(calreticulin, CRT)是介导肿瘤细胞发生免疫原性死亡的关键性信号分子, 在某些理化因素诱导肿瘤细胞发生凋亡的过程中, 内质网上的CRT迅速转位到细胞膜上。作为一种特异的信号分子, 凋亡肿瘤细胞膜上的CRT能介导吞噬细胞对凋亡肿瘤细胞的识别和吞噬。目前有关免疫原性肿瘤细胞死亡的实验数据大多由动物细胞和动物活体实验得到, 人肿瘤细胞在发生免疫原性细胞死亡时, 是否也具有CRT膜转位这样的分子事件还需要进一步探讨。研究分析了3种临床常用的肿瘤化疗药物(柔红霉素、长春新碱、顺铂)对人前列腺癌PC3细胞CRT亚细胞定位的影响, 及其在介导肿瘤细胞免疫原性死亡中的作用。在对比分析的3种临床抗肿瘤药物中, 柔红霉素和顺铂可诱导人前列腺癌PC3细胞发生凋亡, 但仅柔红霉素处理的PC3细胞膜上CRT的表达量显著增加。膜上高表达CRT的PC3细胞能更有效地被吞噬细胞吞噬。结果表明, 柔红霉素作为抗肿瘤药物, 能诱导敏感人肿瘤细胞的免疫原性细胞死亡。

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PI3K/Akt与细胞线粒体途径凋亡因子相关性研究进展

朱美霞, 郝旭亮

生命科学研究. 2015, 19(5): 432-436.

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摘要: 线粒体途径细胞凋亡与多种疾病(如肿瘤、心血管疾病、神经退行性疾病等)密切相关, B淋巴细胞瘤-2 (B-cell leukemia-2, Bcl-2)家族蛋白的调控在这些疾病的治疗中起着重要作用。磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase, PI3K)/丝/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine protein kinase Akt)信号通路作为机体细胞信号转导的重要通路, 可通过影响下游效应分子(Bcl-xL、Bcl-w、Mcl-1、A1、Bax、Bak、Bim、Bad、Bid等)的活性调节细胞的凋亡。就PI3K/Akt与线粒体途径凋亡相关因子的关联性进行综述, 以期发现此通路中某些关键的分子靶点, 为凋亡相关性疾病的治疗及药物研发提供参考。

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几丁质酶的研究进展

糜艳霞, 任慧, 张常, 刘建红, 范晓军

生命科学研究. 2015, 19(5): 437-443.

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摘要: 几丁质是自然界中含量仅次于纤维素的第二大类多糖, 已从各种细菌、真菌、植物、哺乳动物和昆虫中分离并鉴定出来。随着近年来对几丁质及其衍生物的了解, 发现此类多糖的物理化学特性在现实中有非常广泛的应用。几丁质酶是一类分解几丁质的酶, 广泛分布于细菌、真菌、植物、哺乳动物、昆虫等物种中, 并发挥着重要作用。近年来国内外工作者对这些不同来源的几丁质酶做了深入研究, 为其在医学和农业上更广泛的应用提供理论基础。

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质谱MRM技术结合稳定同位素标记法的应用进展

齐林玉, 姜淼, 郭艳, 王迎, 陈平

生命科学研究. 2015, 19(5): 444-451.

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摘要: 定量检测是生物化学研究中最常见的一种分析方法, 可以显示蛋白质的差异表达及翻译后修饰情况, 有助于了解酶的活性状态、信号通路及活性分子间相互作用网络。生物质谱以其高通量、高灵敏度、高分辨率等特点使定量检测技术有了质的飞跃, 促进了蛋白质组学各个领域的发展。近年来出现的质谱多反应监测技术引起了众多研究者的关注, 已被广泛应用在目标定量蛋白质组学研究中。通过查阅文献资料, 综述了质谱多反应监测技术结合稳定同位素标记法在蛋白质组学研究中的应用原理及特点, 总结了近年来的一些研究进展, 最后分析了该技术的局限性及可能优化改进的方面, 以便使该项技术能够被相关研究人员很好利用。

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精氨酸激酶研究进展

黄丽娜, 刘宁, 赵洁, 马纪, 刘小宁

生命科学研究. 2015, 19(5): 452-456.

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摘要: 能量代谢是生物体重要的生命活动之一。精氨酸激酶广泛分布于低等与高等无脊椎动物中, 现已经在直翅目、蜚蠊目、鞘翅目、鳞翅目、双翅目、膜翅目等多种昆虫中得到证实, 是无脊椎动物中能量代谢的重要酶之一。随着研究的深入, 精氨酸激酶的应用前景逐渐显现。对无脊椎动物体内精氨酸激酶的理化性质、表达规律及应用前景等方面的研究进展进行了综述, 并提出了一些建议, 以期为精氨酸激酶今后的研究做铺垫。

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长链非编码RNA调节缺血性脑卒中损伤和修复的研究进展

冯维熙, 孙秀兰

生命科学研究. 2015, 19(5): 457-464.

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摘要: 长链非编码RNA (long noncoding RNA, lncRNA)是一组在转录、转录后和表观遗传水平发挥作用的调控序列, 其在中枢神经系统中特异性高表达, 对中枢神经系统发育和疾病发展具有重要调控作用。缺血性脑卒中诱导脑内大量lncRNA表达改变, 提示lncRNA与缺血性脑卒中复杂的病理过程有关, 这将有利于全面认识缺血性脑卒中的病理机制及脑缺血损伤后的分子调控网络, 并提供新的治疗方向。尽管有少数研究报道lncRNA在缺血性心脏病中的作用, 但目前对于其在缺血性脑卒中病理发展中的作用知之甚少。综述目前已知的lncRNA在脑缺血再灌注损伤、细胞凋亡与抗凋亡及损伤后神经再生与修复中的作用, 并提出了未来可能的lncRNA在缺血性脑卒中损伤与修复中的研究方向。

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细胞因子诱导杀伤细胞过继免疫治疗恶性血液肿瘤的临床应用进展

王艳飞, 杨, 丹, 杨同华, 撒亚莲

生命科学研究. 2015, 19(5): 465-470.

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摘要: 细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells, CIK cells)是将脐血、外周血和骨髓等不同来源的单个核细胞经适当浓度的IFN-γ、IL-2和CD3单抗等联合诱导后获得的异质细胞群。CIK细胞具有增殖能力强、溶瘤谱广、对耐药细胞株也有杀伤作用, 且兼有T细胞强大的杀伤活性和NK细胞(nature killer cells)非主要组织相容性复合体(non-major histocompatibility complex, non-MHC)限制性的特点, 使其在肿瘤治疗中具有广阔的临床应用前景。恶性血液肿瘤患者接受CIK细胞过继免疫治疗的生存时间延长, 不良反应少, 但仍面临许多问题。

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2015年, 第19卷, 第5期　
刊出日期：2015-10-30

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